पीसीआर विश्लेषण: यह क्या है? पीसीआर विश्लेषण लेने के लिए कैसे

यह न तो बहुत पहले मानव में विभिन्न संक्रामक रोगों के निदान के लिए एक विश्वसनीय, अत्यधिक संवेदनशील और तेजी से विधि विकसित की। इस तरह की एक विधि कहा जाता है "पीसीआर विश्लेषण"। यह क्या है, क्या है , अपने सार वह क्या सूक्ष्मजीवों की पहचान कर सकते हैं और यह कैसे लेने के लिए, हम इस लेख में वर्णन करेंगे।

खोज का इतिहास

पोलीमरेज़ चेन प्रतिक्रिया (पीसीआर) का आविष्कार एक अमेरिकी वैज्ञानिक केरी Myullis 1983 में शुरू में, पेटेंट है निदान की विधि "सेटस निगम," द्वारा जिसमें उन्होंने काम किया है और इसके निर्माता। लेकिन 1992 में सभी अधिकार और पेटेंट कंपनी को बेच दिया गया "हॉफमैन-ला रोश।" उसके बाद, यह पता चला कि इसी तरह के अध्ययन समानांतर में किए गए और इस तरह के एलिस चेन, डेविड एडगर, जॉन आरआरई के रूप में अन्य अमेरिका जीव, द्वारा सूचित किया गया। 1980 में वह इस मुद्दे को और सोवियत वैज्ञानिकों ए Slyusarenko ए Kaledin और में लगे हुए S गोरोडेस्की। इसलिए, यह निर्धारित करने के एकमात्र कॉपीराइट का मालिक संभव नहीं हुआ है। कई बकाया जीव रसायन पोलीमर्स प्रतिक्रिया की विधियों के विकास में योगदान दिया है और सर्न उनके नवाचारों का पेटेंट कराया। पीसीआर के इस बिंदु विश्लेषण पर विशेष रूप से सुसज्जित प्रयोगशालाओं भर किया जाता है।

सारांश पीसीआर निदान

पीसीआर विश्लेषण: यह क्या है और यह कैसे काम करता है? विधि का सार तथ्य यह है कि इन विट्रो में एक विशेष एंजाइम डीएनए पोलीमरेज़ का उपयोग करके मात्रा विशिष्ट माइक्रोबियल वातावरण में वृद्धि करने के लिए में निहित है। इस बार बार गुणा उपलब्ध डीएनए सामग्री ऐसा करने के लिए। इस प्रकार, एक नमूने में एक रोगज़नक़ की उपस्थिति राशि जैव रासायनिक प्रयोगशाला में गड़बड़ी की कीमत पर बढ़ जाएगी, और बैक्टीरिया माइक्रोस्कोप में पता लगाने के लिए मुश्किल नहीं होगा।

कैसे सामग्री का अध्ययन किया जाता है?

विश्लेषण की आवश्यकता को पूरा करने के लिए:

• डीएनए टेम्पलेट;
• प्राइमरों सामग्री टुकड़ा के सिरों को जोड़ने;
• थर्मास्टाइबल डीएनए पोलीमरेज़ एंजाइम;
• रसायन, एंजाइमों के सही संचालन को सुनिश्चित;
• बफर समाधान के विकास और डीएनए सामग्री के विकास के लिए उपयुक्त परिस्थितियों बनाने के लिए आवश्यक है।

विकृतीकरण, annealing और बढ़ाव: पीसीआर 25-30 तीन चरणों से मिलकर दोहराता संचालित करने के लिए।

polimezarnoy श्रृंखला प्रतिक्रिया का विश्लेषण करने के लिए एक विशेष उपकरण का उपयोग कर - साइक्लर। आधुनिक उपकरण आप निदान के दौरान त्रुटियों को खत्म करने के लिए आवश्यक हीटिंग और ठंडा ट्यूबों प्रोग्राम स्थापित करने के लिए अनुमति देता है।

कहाँ निदान लागू करने के लिए?

Polimezarnoy श्रृंखला प्रतिक्रिया विधि दवा के विभिन्न क्षेत्रों में उपयोग किया जाता है:

• फोरेंसिक उपयोग यह इस तरह बाल, लार या रक्त के रूप में आनुवंशिक सामग्री की पहचान करने के;
• खून की पीसीआर विश्लेषण जैसे एक विशिष्ट दवा के लिए अलग-अलग आनुवंशिक लगाए प्रतिक्रिया का पता लगाने के लिए, जीनोटाइपिंग में मदद करता है;
• लोगों के बीच एक विधि सेट परिवार के संबंधों से;
• सर्वाधिक मांग पीसीआर विधि विभिन्न संक्रामक रोगों के निर्धारण के लिए चिकित्सा निदान में बन गया है।

क्या संक्रमण पीसीआर का पता चलता है?

इस प्रकार, दवा लंबे सफलतापूर्वक पीसीआर विश्लेषण किया गया है। यह क्या है, हम पहले से ही सीखा है। और कुछ रोगजनकों इसके साथ पता लगाया जा सकता है? पीसीआर का निदान निम्न संक्रमण :

• हेपेटाइटिस ए, बी, सी,
• ureaplasmosis;
• कैंडिडिआसिस;
• क्लैमाइडिया;
• mycoplasmosis;
• बैक्टीरियल वगिनोसिस;
• संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस;
• trichomoniasis;
• एचपीवी संक्रमण;
• तपेदिक;
• 1 और 2 प्रकार के दाद संक्रमण;
• हेलिकोबेक्टर संक्रमण;
• cytomegalovirus;
• डिप्थीरिया;
• सलमोनेलोसिज़;
• एचआईवी संक्रमण।

इसके अलावा, पीसीआर तरीकों कैंसर के निदान में किया जाता है।

विधि के फायदे

नैदानिक पीसीआर के कई फायदे हैं:

1. उच्च संवेदनशीलता। यहां तक कि केवल कुछ ही डीएनए अणु सूक्ष्मजीव साथ पीसीआर विश्लेषण संक्रमण की उपस्थिति निर्धारित करता है। यह पुराने और अव्यक्त रोगों से होने वाली के लिए विधि में मदद करता है। अक्सर ऐसे मामलों में, सूक्ष्मजीव अन्य तरीकों से बीहड़ है।
2. आदेश में इस तरह के लार, रक्त, यौन चयन, बाल, उपकला कोशिकाओं के रूप में किसी भी उपयुक्त सामग्री की जांच के लिए, में। सबसे आम एक रक्त परीक्षण और मूत्रजननांगी पट्टी पीसीआर है।

3. एक विस्तारित बढ़ रही संस्कृतियों की आवश्यकता नहीं। निदान की स्वचालित प्रक्रिया 4-5 घंटे के बाद एक अध्ययन के परिणामों को प्राप्त करने के लिए अनुमति देता है।
4. विधि लगभग पूरी तरह से प्रामाणिक है। झूठी नकारात्मक परिणाम के ही अलग-थलग मामले दर्ज।
5. रोगजनकों के कई प्रकार की पहचान करने के लिए एक नमूना सामग्री में क्षमता। यह न केवल रोग के निदान की प्रक्रिया को गति, लेकिन यह भी काफी माल की लागत कम कर देता है। अक्सर, डॉक्टर पीसीआर की एक व्यापक विश्लेषण निर्धारित करता है। मूल्य सर्वेक्षण, छह रोगाणुओं का निर्धारण करने से मिलकर, 1500 के बारे में रूबल है।

विश्लेषण के लिए तैयार करने पर सिफारिशें

परिणाम मान्य होने के लिए पीसीआर पढ़ाई निदान के लिए प्रारंभिक तैयारी की सिफारिशों के बाद, जांच की आवश्यकता होती:

1. लार के वितरण से पहले सामग्री के नमूने से पहले खाने और 4 घंटे के लिए दवा से बचना चाहिए। इसके तत्काल बाद प्रक्रिया से पहले, उबला हुआ पानी के साथ अपना मुँह कुल्ला।
2. उपरोक्त नियमों निर्देशित किया जाना चाहिए और जब गाल के अंदर से नमूना लेने। धोने के बाद प्रोस्टेटिक स्राव जारी करने के लिए त्वचा पर एक हल्की मालिश बाहर ले जाने की सिफारिश की है।
3. मूत्र आमतौर पर घर पर एकत्र किया जाता है। ऐसा करने के लिए, आप जननांगों का पूरी तरह से शौचालय का संचालन करने की जरूरत है। एक बाँझ प्लास्टिक कंटेनर में मूत्र के 50-60 मिलीलीटर इकट्ठा करने के लिए आवश्यक है। यह अनुशंसा की महिलाओं योनि में तंपन सम्मिलित करने के लिए, और जितना संभव हो उतना पुरुषों को खींचने के लिए त्वचा सामग्री की शुद्धता सुनिश्चित करने के लिए गुना के लिए। आप मासिक धर्म के दौरान सामग्री नहीं ले सकते।
4. शुक्राणु के वितरण के लिए 3 दिन सामग्री के संग्रह से पहले के दौरान संभोग से बचना। इसके अलावा, डॉक्टरों सौना और गर्म पानी से स्नान, शराब और मसालेदार भोजन के उपयोग का परित्याग करने की सलाह दी जाती। 3 घंटे के लिए विश्लेषण करने से पहले पेशाब से परहेज करने के लिए आवश्यक है।
5. अगर एक क्लैमाइडिया पीसीआर पर विश्लेषण, दोनों महिलाओं और पुरुषों 3 दिनों के लिए है कि यौन बाकी की सिफारिश की है, उदाहरण के लिए मूत्रजननांगी धब्बा पास करने के लिए,। विश्लेषण से पहले 2 सप्ताह एंटीबायोटिक दवाओं नहीं ले सकते। एक सप्ताह के लिए आप अंतरंग जैल, मलहम, योनि सपोजिटरी, douching का उपयोग बंद करने की जरूरत है। 3 घंटे अध्ययन करने से पहले पेशाब करने से बचना चाहिए। के दौरान मासिक धर्म बाड़ सामग्री बाहर नहीं किया जाता है, केवल 3 दिन खोलना की समाप्ति के बाद मूत्रजननांगी धब्बा लग सकता है।

गर्भावस्था के दौरान पीसीआर

एक बच्चे के लिए प्रतीक्षा अवधि, कई संक्रामक रोगों, यौन संचारित रोगों, सामान्य भ्रूण के विकास के लिए बेहद खतरनाक हैं। एसटीडी अंतर्गर्भाशयी विकास, गर्भपात या समय से पहले जन्म, बच्चे की जन्मजात विरूपताओं को गति प्रदान कर सकते हैं। इसलिए, यह प्रारंभिक गर्भावस्था पीसीआर स्क्रीनिंग में प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है। दर्रा जब पंजीकरण के विश्लेषण के लिए आवश्यक है - अप 12 सप्ताह के लिए।

बाड़ सामग्री एक विशेष ब्रश के साथ गर्भाशय ग्रीवा नहर से आता है। प्रक्रिया दर्दरहित है और बच्चे को कोई खतरा नहीं बन गया है। आम तौर पर क्लैमाइडिया पीसीआर विधि है, साथ ही ureaplasmosis, mycoplasmosis, cytomegalovirus, दाद, पेपिलोमा वायरस के लिए विश्लेषण किया गर्भावस्था के दौरान। इस तरह की परीक्षा जटिल पीसीआर 6 कहा जाता है।

एचआईवी के निदान के लिए पीसीआर

तथ्य यह है कि पोलीमरेज़ चेन प्रतिक्रिया की विधि शरीर में परिवर्तन और निदान की शर्तों के लिए बहुत संवेदनशील है के कारण, कई कारकों परिणाम को प्रभावित कर सकते हैं। 96-98% - एचआईवी संक्रमण के लिए इसलिए पीसीआर विश्लेषण एक विश्वसनीय तरीका, अपनी क्षमता नहीं है। परीक्षण के शेष 2-4% झूठी सकारात्मक परिणाम देता है।

लेकिन एचआईवी के पीसीआर निदान के बिना कुछ स्थितियों में नहीं कर सकते। आमतौर पर, यह झूठी नकारात्मक एलिसा के साथ लोगों को किया जाता है। इन आंकड़ों से संकेत मिलता है कि व्यक्ति को अभी तक वायरस के लिए एंटीबॉडी विकसित नहीं हुई है और कई की संख्या में वृद्धि के बिना नहीं पाया जा सकता है। इस एक रक्त परीक्षण पीसीआर विधि का आयोजन करके प्राप्त किया जा सकता है।

इसके अलावा जरूरत बच्चों के निदान के जीवन के पहले वर्ष, एचआईवी पॉजिटिव माताओं से पैदा हुए है। विधि एक ही रास्ता मज़बूती से बच्चे की स्थिति का निर्धारण करने के लिए है।

हेपेटाइटिस के निदान के लिए पीसीआर

पोलीमरेज़ चेन प्रतिक्रिया विधि अच्छी तरह से संक्रमण या लक्षणों की उत्पत्ति के लिए एंटीबॉडी के गठन से पहले हेपेटाइटिस ए, बी, सी, के वायरस के डीएनए का पता लगाने के लिए अनुमति देता है। विशेष रूप से प्रभावी, हेपेटाइटिस सी पर पीसीआर विश्लेषण है क्योंकि इस तरह के रोग के 85% स्पर्शोन्मुख रहे हैं और समय पर इलाज के बिना पुरानी हो जाता है।

रोगज़नक़ के समय पर पता लगाने में मदद मिलेगी जटिलताओं और लंबी अवधि के उपचार से बचें।

एकीकृत पीसीआर स्क्रीनिंग

व्यापक पीसीआर विश्लेषण: यह क्या है? इस स्क्रीनिंग पद्धति polimezarnoy श्रृंखला प्रतिक्रिया जो एक साथ कई प्रजातियों संक्रमण का निर्धारण भी शामिल है: माइकोप्लाज्मा genitalium, माइकोप्लाज्मा Hominis, गर्द्नेरेल्ला वेजिनेलिस, कैंडीडा, ट्रायकॉमोनास, cytomegalovirus, Ureaplasma urealitikum, दाद 1 और 2 प्रकार, सूजाक पेपिलोमा वायरस। इस निदान की कीमत 2,000 3,500 को रूबल से लेकर। क्लिनिक, सामग्री और उपकरणों के आधार पर है, साथ ही विश्लेषण के प्रकार पर: गुणात्मक या मात्रात्मक। क्या आपके मामले में की जरूरत है - डॉक्टर का फैसला किया। कुछ मामलों में, आप बस ऐसे एचआईवी, महत्वपूर्ण भूमिका मात्रात्मक अनुमापांक द्वारा निभाई के रूप में दूसरों, में रोगज़नक़ की उपस्थिति का पता लगाने। के रूप में "12 की पीसीआर विश्लेषण" ऊपर रोगजनकों परीक्षा के सभी के निदान में करने के लिए भेजा।

विश्लेषण के परिणाम के गूढ़ रहस्य

ट्रांसक्रिप्शन पीसीआर विश्लेषण सरल है। केवल 2 सूचकांक पैमाने हैं - "। नकारात्मक" "सकारात्मक" और रोगज़नक़ का पता लगाने पर 99% विश्वास के साथ डॉक्टरों मई के रोग की उपस्थिति की पुष्टि कर सकते हैं और रोगी के उपचार शुरू करने के लिए। पता चला जीवाणुओं की एक संगत स्तंभ सूचकांक संख्या में संक्रमण का निर्धारण करने का मात्रात्मक विधि में निर्दिष्ट किया जाएगा। केवल एक डॉक्टर बीमारी की सीमा निर्धारित करने और आवश्यक उपचार की सलाह कर सकते हैं।

कुछ मामलों में, पीसीआर द्वारा एचआईवी संक्रमण का निर्धारण करने, एक नकारात्मक परिणाम के साथ में उदाहरण के लिए, वहाँ अतिरिक्त सर्वेक्षण इन आंकड़ों की पुष्टि करने के लिए एक की जरूरत है।

कहाँ का परीक्षण करने के लिए?

कहाँ से पारित पीसीआर सार्वजनिक क्लिनिक या एक निजी प्रयोगशाला में विश्लेषण? दुर्भाग्य से, नगर निगम के चिकित्सा संस्थानों उपकरण और विधियों में अक्सर पुराने हो गए हैं। इसलिए यह आधुनिक उपकरण और उच्च शिक्षित कर्मियों के साथ निजी प्रयोगशालाओं को वरीयता देने के लिए बेहतर है। इसके अलावा, एक निजी क्लिनिक में आप बहुत तेजी से परिणाम प्राप्त।

मास्को में, कई निजी प्रयोगशालाओं विभिन्न संक्रमणों के लिए पीसीआर विश्लेषण प्रदान करते हैं। उदाहरण के लिए, के रूप में "वीटा", "एकीकृत क्लिनिक," "हैप्पी फैमिली ऐसे क्लीनिकों में", "Uro प्रो", बाहर पीसीआर विश्लेषण किया जाता है। सर्वेक्षण कीमत 200 रूबल है। एक रोगज़नक़ निर्धारण करने के लिए।

यह निष्कर्ष निकाला जा सकता है कि पीसीआर द्वारा संक्रामक रोगों के निदान ज्यादातर मामलों में संक्रमण के प्रारंभिक दौर में शरीर में रोगज़नक़ का पता लगाने के लिए एक त्वरित और विश्वसनीय तरीका है। फिर भी, कुछ मामलों में, निदान के अन्य विधि चुननी चाहिए। इस तरह के एक अध्ययन के लिए की जरूरत केवल एक विशेषज्ञ हो सकता है निर्धारित करें। पीसीआर विश्लेषण डिक्रिप्शन भी एक पेशेवर दृष्टिकोण की आवश्यकता है। अपने डॉक्टर की सलाह का पालन करें और अपने स्वयं के परीक्षण है, जो आवश्यक नहीं हैं देना नहीं है।